原位杂交步骤:
是一项新颖的用于检测位于组织细胞原位的目标RNA的杂交(In Situ Hybridization,ISH)检测技术。该技术进行RNA杂交检测主要分成5步。
1:透化:通过RNAscope?预处理试剂盒处理载玻片上固定好的组织或细胞,暴露目标RNA。
2:探针杂交:针对靶基因设计RNAscope?Z型探针与目标RNA杂交。
3:信号放大:RNAscope?检测试剂盒逐级信号放大。
4:信号可视化:在普通光学显微镜或者多光谱荧光成像系统下,每一个目标RNA分子以一个点状信号的形式呈现。
5:量化分析:显微镜下直接计数或者使用图像分析软件如RNAscope? SpotStudio? 或HALO对每一个细胞中的RNA单分子信号进行定量分析。
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